本品系由無癥狀HBsAg攜帶者血漿提取的HBsAg，經(jīng)純化、滅活及加佐劑吸附后制成。用于預防乙型肝炎。 1　血源 1.1　對獻血員的要求 1.1.1　獻血員應為20～50歲無癥狀HBsAg攜帶者，其肝功能應無顯著異常，并穩(wěn)定。對獻血員的其他要求按《原料血漿采集（單采血漿術）規(guī)程》執(zhí)行。 1.1.2個月接種過活疫苗，1年內(nèi)接種過狂犬病疫苗者，均不采血。 1.1.3　必要時以免疫擴散法（ID）測定HBsAg亞型。血源應以ad亞型為主，可有少量ay亞型。 1.2　單份血漿檢查 1.2.1　無菌試驗 按《生物制品無菌試驗規(guī)程》進行。 1.2.2HbsAg測定 用對流電泳法測定，HBsAg滴度應≥1∶8，或用反向血凝法（RPHA）測定，滴度應≥1∶1024。 1.3　混合血漿檢查 1.3.1支原體檢查 按《生物制品無菌試驗規(guī)程》進行。 1.3.2　取樣接種孔雀綠培養(yǎng)基，35～37℃培養(yǎng)28天，結(jié)果應為陰性。 1.3.3　外源病毒檢查 用Vero細胞和人二倍體細胞各3瓶，每瓶容量為10～15ml，各接種0.2ml樣品，35～37℃培養(yǎng)10天，應無病變出現(xiàn)。用0.2%～0.5%雞與豚鼠紅細胞等量混合后于37℃吸附1小時，測定血吸附反應，應均為陰性。 2　抗原的濃縮和變化 2.1　血漿脫纖維 于血漿中加入氯化鈣溶液，使之脫纖維。 2.2硫酸銨沉淀 于血清中加入硫酸銨飽和溶液，或用固體硫酸銨，使最后達到適宜的飽和度，沉淀HBsA. 2.3　超離心純化 溴化鉀等密度區(qū)帶離心2～3次，每次離心后分部收樣，根據(jù)紫外監(jiān)測峰及密度測定，合并合格的樣品，經(jīng)超濾去鹽濃縮。蔗糖速率區(qū)帶離心1～2次，分離出HBsAg。 3　滅活 3.1　胃酶處理 將HBsAg懸液加入適量胃酶，置35～37℃處理4～5小時，最后超濾去胃酶。 3.2　尿素處理 于HBsAg懸液中加尿素至4～8mol/L置37℃處理4～5小時，超濾去尿素。亦可不用尿素處理。 3.3福爾馬林滅活 于HBsAg懸液中按1∶4000加入福爾馬林，置37℃72～96小時。不用尿素處理者可用1∶2000福爾馬林滅活。 4　稀釋與吸附 已滅活的疫苗原液經(jīng)除菌過濾后，根據(jù)Lowry法檢測折算的特異性蛋白含量進行稀釋，加入A1（OH）3吸附，并于疫苗內(nèi)加入防腐劑。 5　半成品檢定 5.1　總蛋白含量測定 用Lowry法測定，使用檢定所提供的標準品。 5.2HBsAg含量測定 按總蛋白含量將樣品稀釋至不同稀釋度，用RIA或火箭電泳法測定，使用檢定所提供的標準品，HBsAg含量應在90%以上。 5.3　電鏡檢查 取每臺離心機每次蔗糖離心后的樣品，制作5個銅網(wǎng)，在60000倍電鏡下，每個銅網(wǎng)觀察6個視野，結(jié)果應主要為22nm球形顆粒，未見Dane顆粒為合格。有可疑Dane顆粒者應以加倍視野數(shù)檢查。 5.4　殘留雜蛋白檢查 5.4.1　聚丙烯酰胺凝膠電泳法 濃縮膠濃度為4%，分離膠為7.5%，加10μgHBsAg樣品和適量的人血清白蛋白進行電泳，銀染，試驗樣品應不出現(xiàn)明顯雜蛋白帶。 5.4.2SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳法 HBsAg樣品經(jīng)SDS處理后在7.0%濃縮膠和15%分離膠中加入5μg進行電泳，結(jié)果在分離膠中應主要存在22000及28000分子量帶，應不出現(xiàn)明顯的雜蛋白帶。 5.5HBV　DNA檢查 用HBv　DNA片段制備探針，取200μg除菌后的樣品與探針進行雜交，結(jié)果應為陰性?？蒯樀撵`敏度應≤1pg。 5.6　無菌試驗 按《生物制品無菌試驗規(guī)程》進行。 6　分裝 每支安瓿分裝1.0ml，HBsAg含量分別為10μg和30μg兩種規(guī)程。 7　成品檢定 7.1　無菌試驗 按《生物制品無菌試驗規(guī)程》進行。 7.2　安全試驗 每亞批疫苗皮下注射體重14～16g小白鼠，每只0.5ml，注射后第3天和第7天各觀察一次，允許皮下有硬結(jié)，但應健存。 7.3　化學檢定 按《生物制品化學規(guī)定規(guī)程》進行。 7.3.1pH值測定 應為5.5～6.8。 7.3.2　游離甲醛測定 應含游離甲醛，但含量應≤0.01%。 7.3.3　氫氧化鋁含量測定 每ml應不超過1.25mg。 7.3.4　氯化鈉含量測定 應為0.8～0.95%。 7.3.5硫柳汞含量測定 不應超過0.01%。 7.4　效力和鑒別試驗 將疫苗4倍遞增稀釋，每個稀釋度接種BALB/cH2d或NIHq型雌性小白鼠20只，每只腹腔注射1.0ml，4～6周后采血，以RIA法測定抗-HBs，計算小白鼠ED50值與參比苗ED50值，結(jié)果以檢品ED50值/參比ED50值，其比值≥1為合格。 7.5　抗-HBc檢測 每批用6只體重為300～350g同性豚鼠，每只腹部皮下注射疫苗0.5ml，間隔一個月免疫第2次，之后一個月心臟采血，用RIA法檢測免疫前后血清，結(jié)果抗-HBc應陰性，否則應重試。 7.6人體免疫觀察及標準 每年度生產(chǎn)的頭3批疫苗或前、中、后各一批疫苗進行人體免疫觀察，觀察對象為小學生或?qū)W齡前兒童，按0、1、2個月程序每批至少接種20人，每人于上臂三角肌肌內(nèi)注射1.0ml，于3針接種后一個月采血，用RIA法測定三項指標，抗-HBs陽性率（S/N≥10）大于90%，6個月內(nèi)未出現(xiàn)HBsAg者判為合格，否則需要重試。對免疫后單獨出現(xiàn)高滴度抗-HBc者應分析原因。 8　保存與效期 保存于2～8℃暗處，不得凍結(jié)。自檢定合格之日起效期為2年。