1　試劑 1.1　2mol　/L　鹽酸羥胺，冷處保存。 1.23.5mol　/L　氫氧化鈉。 1.3　4mol　/L　鹽酸 濃鹽酸（比重1.18）1份，加2份蒸餾水稀釋。 1.40.37mol　/L　三氯化鐵（FeCl3·6H2O），溶解于0.1mol　/L　鹽酸內(nèi)。 1.50.001mol　/L　醋酸鈉（pH4.5）。 1.62.5mmol　/L　的氯化乙酰膽堿液 精確稱取已干燥至恒重的氯化乙酰膽堿22.7mg，用0.001mol　/L　醋酸鈉液（pH4.5）溶解，移入50ml容量瓶中，用0.001mol　/L　醋酸鈉液稀釋至刻度。 2　操作 2.1　樣品 精確量取樣品1ml（含O-乙?；?.5～2.5μmol）置于試管中，加2ml新鮮配制的堿性羥胺液（等體積的2mol　/L　鹽酸羥胺與3.5mol　/L　氫氫化鈉混合，3小時(shí)內(nèi)可用），搖勻，于室溫放置4分鐘，加1ml　4mol　/L　鹽酸，使pH為1.2±0.2，搖勻，加1ml　0.37mol　/L　三氯化鐵，搖勻，于540nm比色，同時(shí)作一樣品空白，取樣品1ml于試管中，先加1ml　4mol　/L　鹽酸，后加2ml堿性羥胺（即加酸與加堿性羥胺的次序顛倒），加三氯化鐵等操作同上。 2.2　標(biāo)準(zhǔn)曲線 精確量取氯化乙酰膽堿（或溴化乙酰膽堿）標(biāo)準(zhǔn)液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml，分別置于試管中，加蒸餾水補(bǔ)至1ml，其余操作同樣品，同時(shí)作標(biāo)準(zhǔn)空白，即作與上相同的系列標(biāo)準(zhǔn)管，只是加酸與加堿性羥胺的次序顛倒，其他操作均同。 3　計(jì)算 標(biāo)準(zhǔn)管比色讀數(shù)分別減去各自空白比色讀數(shù)，然后畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線。樣品比色讀數(shù)減去其空白讀數(shù)，再從標(biāo)準(zhǔn)曲線查出品相當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)液之ml數(shù)A。 樣品O-乙酰基含量（mmol　/L）=A×2.5 附注 也可采用WHO規(guī)程法，但應(yīng)相應(yīng)提高樣品用量。