本品系精制破傷風(fēng)類毒素經(jīng)氫氧化鋁吸附制成。用于預(yù)防破傷風(fēng)。 1　毒素制造 制造破傷風(fēng)毒素應(yīng)在隔離的具有專用消毒設(shè)備的實驗室內(nèi)進行。實驗室的墻面、地面及實驗臺應(yīng)使用便于消毒的材料。工作人員應(yīng)經(jīng)過培訓(xùn)并接受破傷風(fēng)類毒素全程免疫，以后每10年進行一次加強免疫，凡發(fā)生外傷未完全治愈前不能參加工作。 1.1　菌種 1.1.1　應(yīng)選用中國藥品生物制品檢定所分發(fā)或同意的產(chǎn)毒效價高、免疫力強的破傷風(fēng)菌株，必要時可對菌種進行篩選。 1.1.2菌種應(yīng)定期作全面性狀檢查（如細菌形態(tài)、純菌試驗、糖發(fā)酵反應(yīng)、產(chǎn)毒試驗及特異性中和試驗等），并有完整的傳代、檢定記錄。 1.1.3菌種應(yīng)用凍干或其他適宜方法保存在2～8℃。 1.2　培養(yǎng)基 制造種子管及毒素培養(yǎng)基所用的酪蛋白、黃豆蛋白、牛肉等蛋白質(zhì)應(yīng)適當(dāng)加深水解。其他原材料應(yīng)盡量減少對人體產(chǎn)生過敏反應(yīng)的物質(zhì)，不得含有可引起人體毒性反應(yīng)的物質(zhì)。培養(yǎng)基原材料應(yīng)保證質(zhì)量，所用化學(xué)原料應(yīng)符合《中國生物制品主要原材料試行標準》。 1.3　毒素 1.3.1　毒素制造過程應(yīng)嚴格控制雜菌污染，經(jīng)顯微鏡檢查或純菌試驗發(fā)現(xiàn)污染者應(yīng)廢棄。 1.3.2　毒素須經(jīng)除菌過濾后方可進行下步制造程序，亦可殺菌后進行精制。 1.3.3　毒素Lf測定 用生理鹽水將Lf　檢定用標準破傷風(fēng)抗毒素稀釋至100Lf/ml，按一定間隔遞增量加于一列絮狀檢定用試管中，每管加待檢毒素1ml，搖勻后立即放入50℃水浴中，以首先出現(xiàn)絮狀者判定毒素的Lf值，并記錄絮狀反應(yīng)時間。 1.3.4用于生產(chǎn)的毒素不得低于40Lf/ml。 2　類毒素制造 2.1　毒素或精制毒素的脫毒 毒素或精制毒素中加入適量甲醛溶液，置適宜溫度進行脫毒。所用甲醛溶液等級應(yīng)不低于化學(xué)純。 2.2　脫毒試驗 每瓶取樣，用體重300～400g豚鼠1只，皮下注射10ml。精制毒素脫毒者可事先用生理鹽水稀釋成100Lf/ml，皮下注射5ml，于注射后第7、14、21天進行觀察，動物不應(yīng)有破傷風(fēng)癥狀，到期每只動物體重不得較注射前減輕且健存者為合格，發(fā)生破傷風(fēng)癥狀者應(yīng)繼續(xù)脫毒，體重減輕者應(yīng)予重試。 2.3　脫毒試驗合格的類毒素應(yīng)做Lf測定。類毒素應(yīng)為黃色或棕黃色透明液體。 2.4類毒素之保存時間，自脫毒合格之日起保存于2～8℃不得超過3年。 3　精制 3.1　毒素或類毒素可用等電點沉淀、超濾、硫酸銨鹽析等方法或其他適宜方法精制。 3.2　用于精制的類毒素應(yīng)透明，無肉眼可見之染菌。 3.3　精制時所用化學(xué)藥品等級應(yīng)不低于化學(xué)純或符合《中國藥典》規(guī)定，蒸餾水應(yīng)新鮮。 3.4　類毒素精制后應(yīng)加0.01%(g/ml)硫柳汞防腐并盡快除菌過濾。 3.5用同一菌種、培養(yǎng)基處方、精制方法制造的類毒素在同一容器內(nèi)混合均勻后除菌過濾者為1批。 4　精制類毒素的檢定和保存 4.1pH值應(yīng)為6.6～7.4。 4.2　無菌試驗 按《生物制品無菌試驗規(guī)程》進行。無菌試驗不合格時可重新除菌過濾，如制品有肉眼可見之染菌應(yīng)廢棄。 4.3　效價測定 每瓶取樣進行Lf測定。測定方法見1.3.3項。 4.4　純度 精制類毒素的純度應(yīng)在1500Lf/mgPN以上。 4.5　安全試驗 每亞批取樣，等量混合，用生理鹽水稀釋為250Lf/ml，用體重300～400g豚鼠4只，每只皮下注射2ml。于注射后第7、14、21天進行觀察并稱體重。動物不應(yīng)有破傷風(fēng)癥狀，局部無化膿、壞死，到期每只動物體重比注射前增加者為合格。 4.6　保存與效期 保存于2～8℃。類毒素精制者自精制之日起，先精制后脫毒制品從脫毒試驗合格之日起，效期為3年半。 5　吸附劑配制 5.1　吸附劑配制過程所用的器具應(yīng)清潔、蒸餾水應(yīng)新鮮，各種藥品等級應(yīng)不低于化學(xué)純。 5.2　配制氫氧化鋁，可用三氯化鋁加氨水法或三氯化鋁加氫氧化鈉法，用氨水配制者需透析除氨后使用。 5.3配制成的氫氧化鋁原液應(yīng)為淺藍色或乳白色的膠體懸液，不應(yīng)含有凝塊或異物。 5.4　氫氧化鋁原液應(yīng)取樣測定氫氧化鋁及氯化鈉含量。 6　吸附精制類毒素的制造 6.1　吸附制品每ml應(yīng)含精制破傷風(fēng)類毒素7～10Lf。 6.2　氫氧化鋁用量不得超過3mg/ml。 6.3　吸附制品應(yīng)加0.005%～0.01%(g/ml)硫柳汞為防腐劑。 6.4同批精制類毒素用同批吸附劑吸附者為1批，用大罐吸附時每罐為1批，但所用精制破傷風(fēng)類毒素、氫氧化鋁各不得超過3批。 7　成品檢定 7.1　理化性狀 7.1.1吸附精制破傷風(fēng)類毒素振搖后為乳白色均勻懸液，無搖不散的凝塊及異物。 7.1.2pH值應(yīng)為6.0～7.0。 7.1.3　氫氧化鋁含量不應(yīng)超過3mg/ml。 7.1.4　氯化鈉含量應(yīng)為0.75%～0.9%(g/ml)。 7.1.5　硫柳汞含量不應(yīng)超過0.01%(g/ml)。 7.1.6　游離甲醛含量不應(yīng)超過0.02%（g/ml）。 7.2　無菌試驗 按《生物制品無菌試驗規(guī)程》進行。 7.3　安全試驗 每亞批取樣等量混合，用體重300～400g，豚鼠4只，每只注射2.5ml于腹部皮下，注射后于第7、14、21天各觀察1次并稱體重，動物不應(yīng)有破傷風(fēng)癥狀，注射部位無化膿、壞死，到期體重比注射前增加者為合格。 7.4　效力試驗 每亞批取樣等量混合，用體重300～400g豚鼠4只，每只皮下注射0.5ml，第30天采心血，分離血清，等量混合，測定破傷風(fēng)抗毒素單位，至少應(yīng)含1IU/ml。 抗毒素單位測定方法： 用pH7.0～7.4之硼酸硼砂緩沖生理鹽水，將被檢血清做系列稀釋，各取1ml放入一列試管中，然后各加入5個L+/100量破傷風(fēng)標準毒素1ml（由0.05IU/ml破傷風(fēng)標準抗毒素標定），蓋上膠塞，混合均勻，放37℃結(jié)合45分鐘，每個混合液各用體重15～17g小白鼠3只，每只于后腿皮下注射0.4ml。 同時設(shè)對照組，即取0.05IU/ml的標準抗毒素1ml，加入5個L+/100的標準毒素1ml，放37℃結(jié)合45分鐘。用體重15～17g小白鼠3只，每只于后腿皮下注射0.4ml，每日觀察動物發(fā)病情況并記錄。以72～120小時動物全部死亡為判定標準。 以被檢樣品與對照組動物死亡數(shù)相同之最高稀釋度判定之。 亦可按WHO推薦的效力檢定方法（見附錄）進行。 7.5　穩(wěn)定性試驗 生產(chǎn)工藝有改變時應(yīng)做穩(wěn)定性試驗。抽3批不同批號的精制類毒素配制的成品，保存于2～8℃，在效期結(jié)束之日，進行效力檢定，應(yīng)符合規(guī)程要求。 7.6　鑒別試驗 抽取樣品加枸櫞酸鈉將吸附劑溶解后作絮狀試驗，或?qū)悠氛{(diào)pH至9.0作凝膠免疫沉淀試驗，以出現(xiàn)絮狀反應(yīng)或免疫沉淀反應(yīng)者為合格。 8　保存與效期 保存于2～8℃。自吸附之日起效期為3年半。