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磷含量測定

1 試劑 1.1 高氯酸。 1.2 濃硫酸。 1.3 30%過氧化氫。 1.40.04mol /L 鉬酸銨 取鉬酸銨5g,加蒸餾水溶解成100ml。 1.5 還原劑 稱取亞硫酸氫鈉6g,亞硫酸鈉1.2g,1-氨基-2-茶酚磺酸0.1g,加蒸餾水溶解成50ml,置棕色瓶中保存,一周內(nèi)可用。 1.6 磷標(biāo)準(zhǔn)液 精確稱取已干燥至恒重的磷酸二氫鉀439.3mg,加蒸餾水溶解,移入100ml容量瓶中,稀釋至刻度,為貯備液(1mg磷/ml)。精確量取貯備液2ml,于100ml容量瓶中,加蒸餾水稀釋至刻度,為磷標(biāo)準(zhǔn)液(20μg/ml)。 2 操作 2.1 樣品 A群腦膜炎球菌多糖菌苗成品測磷至少取三支安瓿溶解后混合使用。 精確量取一定體積樣品(含磷4~20μg)于刻度試管中,加4滴濃硫酸(約0.08ml),加熱至炭化,再加2滴高氯酸(約0.06ml),消化至無色澄清,必要時(shí)可加1~2滴30%過氧化氫,但最后必須將過氧化氫除盡。消化后稍置片刻,趁熱另2ml蒸餾水(如冷卻后加水,需再加熱),加0.4ml0.04mol /L 鉬酸銨,混勻,加0.2ml還原劑,混勻,另蒸餾水至6ml,15~20分鐘后,于820nm波長比色。 2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線 精確量取磷標(biāo)準(zhǔn)液(20μg /ml)0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml,分別置于刻度試管中,補(bǔ)加蒸餾水至1ml,其余操作同樣品,可得一標(biāo)準(zhǔn)曲線。 3 計(jì)算 從標(biāo)準(zhǔn)曲線查出樣品相當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)液之ml數(shù)A。 樣品磷含量(μg /ml)=A×20/樣品ml數(shù) 核酸含量測定 取含A群腦膜炎多糖抗原5±1mg /ml溶液,采用紫外分光法于260nm波長測定OD值,按E1%1cm=200計(jì)算核酸含量。