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附錄2 需-厭氧菌無菌試驗培養(yǎng)基靈敏度試驗法

1 菌種 1.1 需氧菌 乙型溶血性鏈球菌(32210株),短芽胞桿菌(7316株)。 1.2厭氧菌 生孢子梭狀芽胞桿菌(64941株)。 以上菌株均由中國藥品生物制品檢定所分發(fā)。 2 培養(yǎng)基 凡應用于無菌試驗的培養(yǎng)基(增菌和試驗用)都應進行靈敏度試驗。 3 操作 3.1 不應在同一無菌操作室內同時操作2個菌株。 3.2 將菌種接種于適宜的培養(yǎng)基,經30~35℃培育一定時間(乙型溶血性鏈球菌和生孢子梭狀芽胞桿菌培育24~48小時,短芽胞桿菌培育18~20小時)后,將乙型溶血性鏈球菌和短芽胞桿菌分別刮入滅菌的生理鹽水內制成均勻菌液,生子孢梭狀芽胞桿菌先將菌液吸入滅菌的試管內,再用滅菌生理鹽水稀釋適宜濃度制成均勻菌液,再將菌液稀釋至與標準比濁管相同之濃度。然后用0.1%蛋白胨水作10倍系列稀釋。 3.3 將10-6~10-8(短芽胞桿菌、生子孢梭狀芽胞桿菌為10-6~10-8,乙型溶血性鏈球菌為10-7~10-9)菌液各1ml分別接種到9ml(用于厭氧菌的培養(yǎng)基在試管中裝置高度不得低于7cm)試驗用培養(yǎng)基中,每個稀釋度至少接種3管,并用未接種的培養(yǎng)基做對照,將接種乙型溶血性鏈球菌、生子孢梭狀芽胞桿菌的培養(yǎng)基,置30~35℃培育3天,接種短芽胞桿菌的培養(yǎng)基培育5天,記錄結果。 4 結果判定 以接種后培養(yǎng)基管數(shù)的2/3以上呈現(xiàn)生長的最高稀釋度為該培養(yǎng)基的靈敏度,3次試驗中,以2次達到的最高靈敏度為判定標準。