附錄 干擾素效價(jià)測(cè)定
采用CPE(細(xì)胞致病效應(yīng))抑制為基礎(chǔ)的抑制微量測(cè)定法,以每ml干擾素檢品的最高稀釋度仍能保護(hù)半數(shù)細(xì)胞(50)免受病毒攻擊的稀釋度的倒數(shù)定為干擾素單位。以國(guó)際單位(IU)表示,并用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品校正結(jié)果。
1 細(xì)胞培養(yǎng)
將新鮮傳代24~48小時(shí)的Wish細(xì)胞(人羊膜細(xì)胞)以約35萬(wàn)/ml的濃度另入96孔組織培養(yǎng)板上,每孔100μl,置37℃5%CO2孵箱中培養(yǎng)4~6小時(shí)。
2 樣品稀釋與細(xì)胞混合
干擾素檢品做4倍系列稀釋,每份檢品做6個(gè)稀釋度(如100萬(wàn)單位,則測(cè)4-12~4-7)每個(gè)稀釋度加2孔,與培養(yǎng)板中的細(xì)胞等量混合,置37℃5%CO25%CO2孵箱培養(yǎng)18~24小時(shí)。
3 加病毒
倒掉培養(yǎng)板中的上清液,以100CCID50/ml的濃度加入VSV(水泡性口腔炎病毒),每孔100μl,37℃5%CO2孵箱培養(yǎng)24小時(shí)左右。
4 觀察結(jié)果
顯微鏡下觀察細(xì)胞病變,若病毒對(duì)照各孔細(xì)胞出現(xiàn)75%~1000%的明顯病變和死亡(變圓、死亡、脫落(,而細(xì)胞對(duì)照組中的細(xì)胞仍生長(zhǎng)良好(病變=0),則表明對(duì)照系統(tǒng)合格,結(jié)果成立。
5 計(jì)算
通??砂碦eed?/FONT>Muench法計(jì)算,其步驟如下:
(1)計(jì)算保護(hù)百分比