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附錄 WHO推薦的破傷風(fēng)類毒素效價測定方法(毒素攻擊法)

1 免疫及攻擊 用生理鹽水將吸附破傷風(fēng)類毒素標準品和待檢樣品以2倍稀釋法稀釋成3~5個稀釋度(中間的稀釋度必須在攻毒后能保護約半數(shù)動物)。每一稀釋度樣品免疫體重14~16g小白鼠14只(或250~350g豚鼠至少10只)。另外10只小白鼠不注射作為對照(另外5只豚鼠不注射作為對照)。免疫4周,每只免疫小白鼠攻擊破傷風(fēng)毒素50LD50(免疫豚鼠攻擊100LD50),皮下注射0.5ml。對照組健康小白鼠注射25倍稀釋的上述毒素(對照組豚鼠注射100倍稀釋的上述毒素),每只皮下注射0.5ml,攻擊后觀察5日,每日記錄結(jié)果。 2 試驗成立應(yīng)具備的條件 (1)檢品的最低稀釋度能保護半數(shù)以上動物。 (2)檢品的最高稀釋度能保護半數(shù)以下動物。 (3)對照組動物應(yīng)部分死亡而不全部死亡。 (4)檢品和標準品的劑量反應(yīng)曲線在平行性及直線性上沒有太大的偏差。 3 結(jié)果計算 用平行線分析法進行結(jié)果計算。 4 結(jié)果判定 待檢樣品的效價每個劑量應(yīng)不少于40IU。如95%可信限大于50%~200%則95%可信限的低限效價應(yīng)大于40IU/1個人用劑量。